【摘要】 Cajal 间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)由诺贝尔医学奖 ... 结果将从细胞和分子水平阐明复胃动物ICC功能形态学,对揭示山羊胃肠道功能有着重要意义, ...CNKI主页|下载阅读器|登录中国优秀硕士学位论文全文数据库节点文献山羊复胃中Cajal间质细胞功能形态学研究StudiesontheMorphologicalandFunctionalCharacteristicsoftheInterstitialCellsofCajalintheRuminant分页CAJ下载分章PDF下载整本CAJ下载整本PDF下载在线阅读不支持迅雷等下载工具。

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【作者】王玲玲；【导师】陈秋生；【作者基本信息】南京农业大学，基础兽医学，2018，硕士【摘要】Cajal间质细胞(interstitialcellsofcajal,ICC)由诺贝尔医学奖得主SantiagoCajal最早在兔的肠神经系统中发现的一类特殊的间质细胞,目前研究表明,它主要功能有:自发性产生慢波;推进胃肠电活动的传播;参与神经信号传递,以及作为平滑肌的牵张感受器,其与胃肠道疾病密切相关。

反刍动物具有瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃,其明显有别于哺乳动物的单室胃。

Cajal间质细胞在单室胃哺乳动物广泛报道,但在山羊复胃中还未报道。

因此本研究以山羊复胃为试验材料,通过免疫组化标记ICC的特异性标记物酪氨酸激酶c-kit,分析ICC光镜结构特点以及分布情况;利用RT-PCR,检测c-kit基因、其配体干细胞因子(stemcellfactor,SCF)在山羊各个胃组织的表达情况;采用WesternBlot,研究c-kit蛋白在山羊各个胃组织的表达情况。

应用透射电镜观察瘤胃中ICC的超微结构特点;运用免疫组化标记波形蛋白Vimentin,探究瘤胃波形蛋白表达分布;通过免疫双标标记波形蛋白Vimentin和蛋白基因产物PGP9.5或者一氧化氮合酶nNOS以及免疫双染Vimentin和PGP9.5,研究瘤胃中ICC与神经的关系。

结果将从细胞和分子水平阐明复胃动物ICC功能形态学,对揭示山羊胃肠道功能有着重要意义,为山羊复胃疾病预防和治疗提供科学依据。

实验Ⅰ山羊复胃中Cajal间质细胞鉴定与分布研究本研究采用免疫组织化学法(IHC)的方法观察了山羊不同复胃的c-kit蛋白免疫阳性细胞的分布特点;利用实时荧光RT-PCR分析山羊不同复胃的c-kit基因以及SCF基因表达情况;应用免疫印迹WesternBlot探究山羊不同复胃的c-kit蛋白表达差异。

结果显示,c-kit蛋白免疫阳性细胞能够标记两种细胞。

第一种阳性细胞为ICC,其形态表现为星形或双极形,带有数量不等的短突起。

在皱胃中ICC分布于粘膜下层、肌间层,以及肌内层,且各层分布密度多;在瓣胃中ICC分布在粘膜下肌层和肌间层,肌内层,但肌内层分布较少;在瘤胃中ICC分布于上皮下层和肌内层;在网胃中分布在粘膜下层和肌内层。

第二种阳性细胞为肥大细胞,形态表现为圆形;主要位于粘膜下和固有层。

对于山羊不同的复胃c-kit基因和SCF基因分布有差异。

C-kit基因在皱胃高表达;在瓣胃、瘤胃次之;网胃表达最低。

SCF基因表现为皱胃表达最高,在网胃,瘤,瓣胃表达次之。

C-kit蛋白表现为皱胃高表达,瘤胃、网胃、瓣胃差异不明显。

这些结果表明,ICC在山羊复胃动力学机制中发挥着重要的调控作用。

实验Ⅱ山羊瘤胃中Cajal间质细胞的超微结构特点本试验运用透射电镜探究山羊瘤胃中ICC的超微结构特点。

结果显示,ICC胞体表现为纺锤形或星形,带数量不等的短突起。

细胞核呈梭形或不规则形,核周边有大量的异染色质。

细胞质中含有丰富的细胞器,包括有高尔基体复合体,线粒体,和粗面内质网,同时还发现有不连续的基底膜。

在胞质中偶尔可见中间丝。

同时可以经常发现细胞质膜上有数量不等的胞膜小凹分布。

ICC与神经形成突触样的结构,同时与平滑肌细胞形成缝隙连接。

根据分布位置的不同可分为三种亚型,一种位于环形肌与纵行肌之间的肌间神经丛内称为肌间ICC,第二种位于环形肌和纵行肌之内称为肌内ICC,最后