瑞氏染色法 | 瑞特氏染劑

瑞氏染色法就是用瑞氏染色液對細胞進行染色。

基本介紹1 .瑞氏染料是由鹼性染料美藍( Methvlem blue )和酸性染料黃色伊紅( Eostm Y )合稱伊紅美藍染料即 ...瑞氏染色法瑞氏染色法就是用瑞氏染色液對細胞進行染色。

基本介紹1.瑞氏染料是由鹼性染料美藍(Methvlemblue)和酸性染料黃色伊紅(EostmY)合稱伊紅美藍染料即瑞氏(美藍-伊紅Y)染料。

伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子,無色部分為陽離子,其有色部分為酸性,故稱伊紅為酸性染料。

美藍通常為氯鹽是鹼性的,美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽,其有色部分為陽離子,無色部分為陰離子,恰與伊紅鈉鹽相反。

2.用甲醇作瑞氏染料溶劑,即成瑞氏染液。

甲醇是瑞氏染料良好溶劑,有兩種作用:(1)甲醇使瑞氏染料中美藍(M)與伊紅(E)在溶液中離解,可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。

甲醇ME(瑞氏染料)————→M++E-在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青,美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色,但不能使胞漿染為藍色,多餘美藍就可以使胞漿染成藍色,染色主要是化學作用,是離子彼此結合的反應。

(2)甲醇具有強大的脫水力,可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積,提高細胞對染料吸收作用,同時由於甲醇吸附染色液中的水,使染色液升溫,加速染色反應。

3.瑞氏染液配製:(1)瑞氏染液配製:瑞氏染料830gm或1g甲醇(AR)500ml或600ml先稱乾燥(事先放入溫箱乾燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤,而無染料粉粒沉著,再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重複數次,直至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口,存室溫暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存3個月以上為佳。

(2)緩衝液:1)緩衝液作用:染色對氫離子濃度是十分敏感的,據觀察pH值的改變,可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。

緩衝液須保持一定的pH使染色穩定,PBS的pH一般在6.4~6.8,偏鹼性染料可與緩衝液中酸基起中和作用,偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用,使pH恆定。

2)緩衝液配製(pH6.4~6.8,弱酸性):配方1:配方2:1%KH2PO430mlM/15KH2PO473.5ml1%Na2HPO420mlM/15Na2HPO426.5mlH2O(新鮮)加至1000ml置室溫黑暗處,瓶口密封,防止黴菌污染,如有污染則應報廢。

簡易步驟1、取病料塗片、自然乾燥2、滴加瑞氏染液染3分鐘,使標本被其中甲醛所固定;3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩衝液(或等量超純水)輕輕晃動玻片,均勻靜置5分鐘;4、水洗、吸乾、鏡檢。

5、細菌染成藍色,組織細胞胞漿紅色,細胞核藍色或紫色。

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