解讀公告的腸桿菌科計數方法、VRBGA 的檢測原理-台美檢驗 | 大腸桿菌革蘭氏
3)可使細胞膜滲漏，因此可抑制腸道菌的大多數菌，主要是革蘭氏陽性菌（不能 ... VRBGA 與分離大腸桿菌的VRBA（結晶紫中性紅膽鹽瓊脂）組成分稍有不同， ...首頁>焦點訊息>解讀公告的腸桿菌科計數方法衛福部公告的腸桿菌科檢驗方法流程圖 衛福部食藥署公告的食品中腸桿菌科計數檢驗流程示意圖 解讀公告的腸桿菌科計數(EnumerationofEnterobacteriaceae)方法VRBGA的檢測原理 VRBGA（結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂，紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂）的組成分中含有乳糖（雙糖）及葡萄糖（單糖），微生物通常先利用葡萄糖作為碳素源，耗盡後才將乳糖分解為葡萄糖。
此外，蛋白腖及酵母抽出液則作為氮素源、微量元素及生長因子的來源，膽鹽(bilesaltNo.3)可使細胞膜滲漏，因此可抑制腸道菌的大多數菌，主要是革蘭氏陽性菌（不能抑制葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌以及一些芽孢桿菌）和部分的革蘭氏陰性菌（不包括腸內菌）。
VRBGA與分離大腸桿菌的VRBA（結晶紫中性紅膽鹽瓊脂）組成分稍有不同，後者不含有葡萄糖，僅含有乳糖，且瓊脂的濃度為15~18g/L（前者為 10~12g/L）。
VRBA適用於乳糖發酵性大腸桿菌群的分離，而VRBGA適合所有腸桿菌科菌種的分離，分離的菌種類別涵蓋較廣。
衛福部公告的腸桿菌科檢驗方法建議利用葡萄糖氧化發酵試驗(O/FGlucosefermentationtest)進行腸桿菌科初步生化試驗主要是區分葡萄糖發酵性（如腸內菌）及非發酵性革蘭氏陰性桿菌（如假單胞菌），所用的培養基為O/FGlucosemedium，加入的瓊脂（洋菜）為3.5g/L蒸餾水。
因此，屬於半固體培養基，雖然配方沒有什麼特別，但培養基原料可影響測試菌的生化反應結果，因此要慎選廠牌，編著者多年的經驗以BD-Difco之粉末培養基可獲得正確的結果。
原料中酪蛋白酵素水解物(enzymaticdigestofcasein)及葡萄糖(glucose)可提供碳素源、氮素源、微量元素及生長因子，磷酸氫二鉀(K2HPO4)可提供酸鹼緩衝環境，氯化鈉(sodiumchloride)可維持滲透壓，至於溴瑞香草酚藍(bromothymolblue)作為pH變化的指示劑，在酸性環境(pH6.0)呈黃色，鹼性(pH7.6)呈深藍色。
因為葡萄糖氧化發酵試驗(O/FGlucosetest)係測定測試菌的還原葡萄糖能力，因此，接種後要加入無菌的礦物，以維持無氧狀態。
腸桿菌科的菌種特性為能夠利用葡萄糖產酸，使用的測試培養基為葡萄糖氧化發酵試驗(O/FGlucosefermentationtest)，不能用TSA+葡萄糖+酚紅(phenolred)或溴甲酚紫(bromcresolpurple)指示劑，也不能用TSB+葡萄糖+酚紅或溴甲酚紫指示劑做為測試培養基，如欲進行詳細菌種的鑑定，可利用API-20E或RapIDonE套組，也可用自動化鑑定套組或MALDI-TOFMS系統。
然而，衛福部公告的方法稱如使用經確效認可之市售培養基、生化檢測套組或生化鑑定系統，其檢驗結果有爭議時，以公告的檢驗方法為準。
氧化酶試驗主要用於區分腸桿菌科菌種（氧化酶陰性）與氧化酶陽性之革蘭氏陰性非腸道菌如產氣單胞菌(Aeromonas)，鄰志賀單胞菌(Plesiomonasshigelloides)、弧菌(Vibriospecies)、假單胞菌(Pseudomonas)等。
氧化酶反應係根據細菌的細胞色素(cytochrome)氧化酶系統利用分子氧活化還原型的細胞色素，然後作為電子傳送系統最終步驟的電子接受者(electronacceptor)﹝即氫氣接受者(hydrogenacceptor)﹞，再根據菌種及酵素系統的不同，從氫氣產生水或過氧化氫(hydrogenperoxide)。
氧化酶催化氫氣從基質移除，但僅利用氧氣作為氫氣的接受者。
由於氧化酶試劑容易因空氣而快速氧化，有效期為1天，因此必須於試驗當天新鮮配製。
Oxidase（氧化酶）試劑製配製方法：配1%tetramethyl-para-phenylenediaminedihydrochloride溶液，以0.1g試劑溶於10mL純水，或用一支木棒挑取少許試劑粉末（約0.1g）與 10mL純水混合。
配製後須放置15分鐘後才能使用。
食品微生物檢驗技術以上摘自「食品微生物檢驗技術」第11章「腸桿菌科(Enterobacteriaceae)之檢驗」第三節，本章節共有七小節：第一節前言第二節公告的食品中腸
此外，蛋白腖及酵母抽出液則作為氮素源、微量元素及生長因子的來源，膽鹽(bilesaltNo.3)可使細胞膜滲漏，因此可抑制腸道菌的大多數菌，主要是革蘭氏陽性菌（不能抑制葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌以及一些芽孢桿菌）和部分的革蘭氏陰性菌（不包括腸內菌）。
VRBGA與分離大腸桿菌的VRBA（結晶紫中性紅膽鹽瓊脂）組成分稍有不同，後者不含有葡萄糖，僅含有乳糖，且瓊脂的濃度為15~18g/L（前者為 10~12g/L）。
VRBA適用於乳糖發酵性大腸桿菌群的分離，而VRBGA適合所有腸桿菌科菌種的分離，分離的菌種類別涵蓋較廣。
衛福部公告的腸桿菌科檢驗方法建議利用葡萄糖氧化發酵試驗(O/FGlucosefermentationtest)進行腸桿菌科初步生化試驗主要是區分葡萄糖發酵性（如腸內菌）及非發酵性革蘭氏陰性桿菌（如假單胞菌），所用的培養基為O/FGlucosemedium，加入的瓊脂（洋菜）為3.5g/L蒸餾水。
因此，屬於半固體培養基，雖然配方沒有什麼特別，但培養基原料可影響測試菌的生化反應結果，因此要慎選廠牌，編著者多年的經驗以BD-Difco之粉末培養基可獲得正確的結果。
原料中酪蛋白酵素水解物(enzymaticdigestofcasein)及葡萄糖(glucose)可提供碳素源、氮素源、微量元素及生長因子，磷酸氫二鉀(K2HPO4)可提供酸鹼緩衝環境，氯化鈉(sodiumchloride)可維持滲透壓，至於溴瑞香草酚藍(bromothymolblue)作為pH變化的指示劑，在酸性環境(pH6.0)呈黃色，鹼性(pH7.6)呈深藍色。
因為葡萄糖氧化發酵試驗(O/FGlucosetest)係測定測試菌的還原葡萄糖能力，因此，接種後要加入無菌的礦物，以維持無氧狀態。
腸桿菌科的菌種特性為能夠利用葡萄糖產酸，使用的測試培養基為葡萄糖氧化發酵試驗(O/FGlucosefermentationtest)，不能用TSA+葡萄糖+酚紅(phenolred)或溴甲酚紫(bromcresolpurple)指示劑，也不能用TSB+葡萄糖+酚紅或溴甲酚紫指示劑做為測試培養基，如欲進行詳細菌種的鑑定，可利用API-20E或RapIDonE套組，也可用自動化鑑定套組或MALDI-TOFMS系統。
然而，衛福部公告的方法稱如使用經確效認可之市售培養基、生化檢測套組或生化鑑定系統，其檢驗結果有爭議時，以公告的檢驗方法為準。
氧化酶試驗主要用於區分腸桿菌科菌種（氧化酶陰性）與氧化酶陽性之革蘭氏陰性非腸道菌如產氣單胞菌(Aeromonas)，鄰志賀單胞菌(Plesiomonasshigelloides)、弧菌(Vibriospecies)、假單胞菌(Pseudomonas)等。
氧化酶反應係根據細菌的細胞色素(cytochrome)氧化酶系統利用分子氧活化還原型的細胞色素，然後作為電子傳送系統最終步驟的電子接受者(electronacceptor)﹝即氫氣接受者(hydrogenacceptor)﹞，再根據菌種及酵素系統的不同，從氫氣產生水或過氧化氫(hydrogenperoxide)。
氧化酶催化氫氣從基質移除，但僅利用氧氣作為氫氣的接受者。
由於氧化酶試劑容易因空氣而快速氧化，有效期為1天，因此必須於試驗當天新鮮配製。
Oxidase（氧化酶）試劑製配製方法：配1%tetramethyl-para-phenylenediaminedihydrochloride溶液，以0.1g試劑溶於10mL純水，或用一支木棒挑取少許試劑粉末（約0.1g）與 10mL純水混合。
配製後須放置15分鐘後才能使用。
食品微生物檢驗技術以上摘自「食品微生物檢驗技術」第11章「腸桿菌科(Enterobacteriaceae)之檢驗」第三節，本章節共有七小節：第一節前言第二節公告的食品中腸